血液成分分析仪(通常指全自动血液细胞分析仪)的原理、结构和算法。这是现代医学检验中最核心、最自动化的大型设备之一,用于完成全血细胞计数(CBC)和白细胞分类(WBC Differential)。
一、核心原理(The Core Principle)
血液成分分析仪的核心原理是电阻抗法(库尔特原理)和流式细胞术与光散射技术的结合。
1.电阻抗法(库尔特原理)
这是用于红细胞(RBC)、血小板(PLT)计数和体积测量的基础原理。
原理:将血液样本在电解液中稀释,使其通过一个非常微小的孔径(宝石孔)。在孔的两侧各有一个电极。
过程:当每个血细胞通过孔径时,会瞬间取代相同体积的电解液,导致两电极间的电阻发生一个短暂的、与细胞体积成正比的变化。
结果:每次电阻变化产生一个电压脉冲。脉冲的数量代表了通过孔的细胞数量(计数),而脉冲的高度则代表了细胞的体积。
应用:主要用于RBC、PLT的计数和MCV(平均红细胞体积)的测量。
2.流式细胞术与光散射
这是用于白细胞(WBC)计数、分类和更高级分析的的核心原理。
鞘流技术:将稀释后的血细胞样本注入一个快速流动的鞘液流中央,使得细胞被约束在液流的中心,单列逐个通过检测区域,这是精确分析的前提。
化学染色与荧光:在WBC分类中,会使用特殊的溶血剂和荧光染料。溶血剂破坏红细胞,并对白细胞膜进行“打孔”。染料则进入白细胞,与细胞核(DNA/RNA)和胞内颗粒(如中性粒细胞的颗粒)特异性结合。
检测:当被染色的细胞逐个通过一个激光束时,会产生两种信号:
前向角散射光:其强度与细胞的大小/体积相关。
侧向角散射光:其强度与细胞的内部复杂性(如颗粒多少、核形)相关。
侧向荧光:其强度与细胞内核酸(DNA/RNA)的含量相关。
应用:通过分析每个细胞在这三个参数(FSC, SSC, SFL)上的差异,可以将五种白细胞(中性粒、淋巴、单核、嗜酸、嗜碱)精确地区分开来。
3.比色法
用于测量血红蛋白(HGB)浓度。
原理:溶血剂将红细胞完全破坏,释放出血红蛋白。血红蛋白与试剂中的氰化物反应生成稳定的氰化高铁血红蛋白。
检测:该化合物在特定波长(通常为540nm)下有最大吸收峰。通过测量该波长下吸光度的变化,即可计算出血红蛋白的浓度。
二、设备结构(Instrumentation Diagram & Description)
一台全自动血液分析仪是一个高度复杂的机电一体化系统,其核心工作流程和模块如下:
图表代码
下载
B
RBC/PLT检测池
(电阻抗法)
HGB比色计
(光度计)
WBC分类检测池
(流式细胞术+荧光)
样本处理与分配系统
样本条码识别
样本针
(液位感应与防堵)
精密分注系统与搅拌器
试剂仓与液路系统
信号处理与数据采集
(前置放大器, ADC转换)
微处理器与计算机系统
算法分析与计算
结果输出与审核
以下是各部件的详细功能:
样本处理系统:
样本针:带有液面感应和堵孔报警功能,用于吸取全血样本。
分注系统:精密的注射泵和电磁阀,负责将样本和不同试剂(稀释液、溶血剂、染色剂)按精确比例混合,并分配到不同的检测池中。
混匀器:确保样本和试剂充分混合反应。
检测系统(仪器的“心脏”):
RBC/PLT检测单元:包含宝石孔、电极和相应的电路,用于电阻抗法测量。
HGB比色计:包括光源(灯泡/LED)、滤光片和光电探测器,构成一个微型分光光度计。
WBC分类检测单元(流式细胞仪):这是最复杂的部分。
鞘流系统:由鞘液注射泵和流动室构成。
激光器:通常是小功率的半导体激光器。
光学系统:包括透镜、滤光片和一系列光电倍增管(PMT)或光电二极管(PD),用于收集前向散射光(FSC)、侧向散射光(SSC)和侧向荧光(SFL)信号。
液压与管路系统:
功能:输送样本、试剂、鞘液和清洗液。包含大量的管道、阀和泵,其设计和精度直接影响结果的准确性和交叉污染率。
信号处理与计算系统:
前置放大器:将检测器产生的微弱电流信号转换为电压信号并放大。
模数转换器:将模拟电压信号转换为数字信号,供计算机处理。
三、算法与数据处理(Algorithms & Data Processing)
仪器测量到的原始信号需要经过复杂的算法处理才能转化为临床医生能读懂的报告。
1.脉冲处理算法(RBC/PLT)
阈值筛选:设定电压脉冲的阈值,以区分电噪声和真实的细胞信号。
重合丢失校正:当两个细胞同时通过孔时,会被计为一个脉冲,导致计数偏低。算法会根据计数率和孔径尺寸进行概率统计,估算出重合的细胞数并进行校正。
体积直方图分析:
RBC直方图:横坐标为细胞体积(fL),纵坐标为细胞数量。算法通过分析该直方图计算出平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)等参数。
PLT直方图:血小板体积更小(2-30 fL)。算法必须能准确地将血小板脉冲与电子噪声、细胞碎片、小红细胞等干扰信号区分开来。通常使用拟合曲线法(如对数正态分布拟合)来估算血小板的真实数量和体积参数(MPV)。
2.散点图分析与细胞分类算法(WBC)
这是最核心的算法。
数据可视化:将每个细胞的三参数(FSC, SSC, SFL)数据绘制成二维散点图,例如:
SSC vs. SFL散点图:是区分淋巴细胞、单核细胞、嗜酸/嗜碱粒细胞和中性粒细胞的关键。
FSC vs. SFL散点图:等。
细胞群聚类算法:
设门:算法会自动在散点图上划分出不同的区域(“门”),每个门对应一种白细胞亚群。
聚类算法:使用密度聚类(如DBSCAN)或边界划分算法,根据细胞点在散点图上的密集程度,自动识别出不同的细胞群体。
计数:统计每个“门”内的细胞数量,即可得到每种白细胞的绝对值和百分比。
3.质量控制与标记算法
报警算法:仪器会基于内置规则,自动判断结果是否可靠或是否存在异常细胞。
例如:如果血小板直方图出现尾部翘起或峰形异常,仪器会标记“血小板聚集?”或“存在大血小板?”。
例如:如果在WBC散点图上出现异常细胞群(如未成熟粒细胞、异型淋巴细胞、原始细胞),仪器会标记“幼稚细胞?”、“异常淋巴细胞?”等报警信息,提示检验人员需要进行人工显微镜涂片复查。
溯源与校准:算法会存储每日质控品的检测结果,绘制Levey-Jennings质控图,监控仪器状态的稳定性。
总结
原理:基于电阻抗法(计数和体积)、流式细胞术(WBC分类)和比色法(HGB)三大物理化学原理。
结构:是样本处理、精密液路、光学检测和电子信号处理四大系统的高度集成。
算法:核心是脉冲分析(RBC/PLT)、散点图聚类分析(WBC分类)和智能报警。算法将原始的物理信号转化为具有临床意义的医学数据,并保证其准确性和可靠性。
现代血液分析仪完美体现了多学科技术的融合,其高度自动化使得一份血常规样本在几十秒内即可完成分析,成为临床诊断不可或缺的利器。

